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亲和共电泳

电泳

电泳是指带微量电的基团在通电的情况下,向不同的电极运动。这一般用于区分胶体。当然,胶体必须带电。比如Fe(OH)3的胶体就有电泳现象。

原理与实验

分离过程在由膜隔开的多通道电泳槽中进行,电场方向与各腔室中的溶液流动方向垂直。带不同电荷的蛋白质混合物进入进样室,带电的目标组分在电场作用下迁移进入介质室,被亲和介质吸附。带电性质与目标组分相近的杂质蛋白在电场作用下通过介质室,继续迁移进入冲洗室并被冲洗溶液带出;而带电性质与目标组分相反的杂质蛋白质在电场作用下直接迁移进入另一侧的冲洗室,然后被冲洗液带出,减少了杂质蛋白质在介质中的非特异性吸附,从而提高了分离过程的选择性。吸附完成后,引入洗脱缓冲溶液,在电场作用下将目标组分从介质上洗脱下来,并迁移入冲洗室被冲出,完成分离过程。

装置



装置为6腔室结构的电泳槽,各腔室间用隔开,如图2所示。电极室与冲洗室之间用自行合成的lmm厚的凝胶膜

亲和共电泳亲和共电泳
8隔开;冲洗室、介质室及进样室之间用HT Tuffryn 450膜隔开。各腔室的长度均为12cm,宽度增为12cm,阳极室、阴极室、阳极冲洗室、阴极冲洗室、进样室和介质室的厚度分别为4.0、4.0、3.0、4.0、3.0和4.5mm。采用铂丝作为电泳槽的阳极阴极

实验方法


实验时,首先用泵将吸附缓冲溶液连续输入电极室冲洗室进样室,然后开启电泳仪电源。当亲和介质与吸附缓冲溶液达到平衡后,将含蛋白质的样品缓冲溶液泵入进样室,开始电泳吸附。电泳吸附过程持续约60min后,进行15min左右的电泳淋洗。之后关闭电泳仪电源,将缓冲溶液更换为洗脱缓冲溶液,再打开电泳仪电源,进行电泳洗脱。实验结束后,用6moL/L尿素再生介质。

http://www.cqvip.com/qk/91045X/200103/5343458.html

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