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PFUDNA聚合酶

PfuDNA聚合酶(Pfu DNA polymerase),又称Pfu聚合酶,或Pfu酶,是在嗜热的古核生物火球菌属内发现的,一类能在活体内进行DNA复制的酶。体外实验中,在聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)中,使用Pfu聚合酶可以快速,高保真的扩增DNA片段。

Pfu聚合酶的校正作用
与其它在PCR反应中使用的聚合酶相比,Pfu聚合酶有着出色的热稳定性,以及特有的“校正作用”。与TaqDNA聚合酶不同,PfuDNA聚合酶具有3'-5'外切酶的即时校正活性,可以即时的识别并切除错配核苷酸。因此,使用PfuDNA聚合酶进行PCR反应,比使用Taq聚合酶有较低的错配突变几率,保真性更高。Pfu聚合酶正逐渐取代Taq聚合酶,成为使用最广的PCR工具。

商业化的Pfu聚合酶试剂,其出错率是100万到130万个碱基对出现一个错配,使用PCR每扩增1kb的DNA片段会产生2.6%的突变产物。但缺点是,Pfu聚合酶的效率较低。一般来说,在72° C扩增1kb的DNA时,每个循环需要1到2分钟。而且使用Pfu聚合酶进行PCR反应,会产生钝性末端的PCR产物。

Pfu聚合酶常常用于保真性要求较高的DNA合成中。有报道说,Pfu聚合酶与Taq聚合酶联合使用,既能达到Pfu聚合酶的高保真性,又能发挥Taq聚合酶的快速聚合活性。

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