电子显微镜

电子显微镜常用的有透射电镜（transmissionelectronmicroscope，TEM）和扫描电子显微镜（scanningelectronmicroscope,SEM）。与光镜相比电镜用电子束代替了可见光，用电磁透镜代替了光学透镜并使用荧光屏将肉眼不可见电子束成像。与光镜相比电镜用电子束代替了可见光，用电磁透镜代替了光学透镜并使用荧光屏将肉眼不可见电子束成像。

电子显微镜是使用电子来展示物件的内部或表面的显微镜。

高速的电子的波长比可见光的波长短（波粒二象性），而显微镜的分辨率受其使用的波长的限制，因此电子显微镜的分辨率（约0.1纳米）远高于光学显微镜的分辨率（约200纳米）。

电子显微镜的主要组成部分是：
电子源是一个释放自由电子的阴极，一个环状的阳极加速电子。阴极和阳极之间的电压差必须非常高，一般在数千伏到3百万伏之间。

电子透镜用来聚焦电子。一般使用的是磁透镜，有时也有使用静电透镜的。电子透镜的作用与光学显微镜中的光学透镜的作用是一样的。光学透镜的焦点是固定的，而电子透镜的焦点可以被调节，因此电子显微镜不象光学显微镜那样有可以移动的透镜系统。

真空装置用以保障显微镜内的真空状态，这样电子在其路径上不会被吸收或偏向。

样品架 样品可以稳定地放在样本架上。此外往往还有可以用来改变样品（如移动、转动、加热、降温、拉长等）的装置。

探测器，用来收集电子的信号或次级信号。

利用透射电子显微镜（Transmission Electron Microscopy TEM，台译穿透式电子显微镜）可以直接获得一个样本的投影。在这种显微镜中电子穿过样本，因此样本必须非常薄。组成样本的原子的原子量、加速电子的电压和所希望获得的分辨率决定样本的厚度。样本的厚度可以从数纳米到数微米不等。原子量越高、电压越低，样本就必须越薄。

电子显微镜下的丝绸纤维

通过改变物镜的透镜系统人们可以直接放大物镜的焦点的像。由此人们可以获得电子衍射像。使用这个像可以分析样本的晶体结构。

在能量过滤透过式电子显微镜（Energy Filtered Transmission Electron Microscopy，EFTEM）中人们测量电子通过样本时的速度改变。由此可以推测出样本的化学组成，比如化学元素在样本内的分布。

扫描电子显微镜（Scanning electron microscope，SEM）中的电子束尽量聚焦在样本的一小块地方，然后一行一行地扫描样本。入射的电子导致样本表面散发出电子，显微镜观察的是这些每个点散射出来的电子。由于这样的显微镜中电子不必透射样本，因此其电子加速的电压不必非常高。场发射扫描电子显微镜是一种比较简单的电子显微镜，它观察样本上因强电场导致的场发射所散发出来的电子。

假如观察的是透过样本的扫描电子的话，那么这>（Scanning Transmission Electron Microscopy，STEM）。

病毒的电子显微镜照片

在使用透视电子显微镜观察生物样品前样品必须被预先处理。随不同研究要求的需要科学家使用不同的处理方法。

固定：为了尽量保存样本的原样使用戊二醛来硬化样本和使用锇酸来染色脂肪。
冷固定：将样本放在液态的乙烷中速冻，这样水不会结晶，而形成非晶体的冰。这样保存的样品损坏比较小，但图像的对比度非常低。
脱干：使用乙醇和丙酮来取代水。
垫入：样本被垫入后可以分割。
分割：将样本使用金刚石刃切成薄片。
染色：重的原子如铅或铀比轻的原子散射电子的能力高，因此可被用来提高对比度。

使用透视电子显微镜观察金属前样本要被切成非常薄的薄片（约0.1毫米），然后使用电解擦亮继续使得金属变薄，最后在样本中心往往形成一个洞，电子可以在这个洞附近穿过那里非常薄的金属。无法使用电解擦亮的金属或不导电或导电性能不好的物质如硅等一般首先被用机械方式磨薄后使用离子打击的方法继续加工。为防止不导电的样品在扫描电子显微镜中积累静电它们的表面必须覆盖一层导电层。

在电子显微镜中样本必须在真空中观察，因此无法观察活样本。在处理样本时可能会产生样本本来没有的结构，这加剧了此后分析图像的难度。由于投射电子显微镜只能观察非常薄的样本，而有可能物质表面的结构与物质内部的结构不同。此外电子束可能通过碰撞和加热破坏样本。

现在的最新技术可以在电子显微镜中观察湿的样本和不涂导电层的样本（环境扫描电子显微镜，Environmental Scanning Electron Microscopes，ESEM）。假如事先对样本的情况比较清晰的话则可以基本上进行不破坏的观察。

此外电子显微镜购买和维护的价格都比较高。

1926年汉斯·布什研制了第一个磁力电子透镜。1931年厄恩斯特·卢斯卡和马克斯·克诺尔研制了第一台透视电子显微镜。展示这台显微镜时使用的还不是透视的样本，而是一个金属格。1986年卢斯卡为此获得诺贝尔物理学奖。1938年他在西门子公司研制了第一台商业电子显微镜。

1934年锇酸被提议用来加强图像的对比度。1937年第一台扫描透射电子显微镜推出。

一开始研制电子显微镜最主要的目的是显示在光学显微镜中无法分辨的病原体如病毒等。1949年可投射的金属薄片出现后材料学对电子显微镜的兴趣大增。

1960年代投射电子显微镜的加速电压越来越高来透视越来越厚的物质。这个时期电子显微镜达到了可以分辨原子的能力。

1980年代人们能够使用扫描电子显微镜观察湿样本。1990年代中电脑越来越多地用来分析电子显微镜的图像，同时使用电脑也可以控制越来越复杂的透镜系统，同时电子显微镜的操作越来越简单。

1．透射电镜技术透射电镜技术

透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所產生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率為0.1～0.2nm，放大倍数為几万～几十万倍。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍。由於电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备更薄的超薄切片（通常為50～100nm）。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备更薄的超薄切片（通常为50～100nm）。其制备过程与石蜡切片相似，但要求极严格。其制备过程与石蜡切片相似，但要求极严格。要在机体死亡后的数分鐘钓取材，组织块要小(1立方毫米以内），常用戊二醛和饿酸进行双重固定树脂包埋,用特制的超薄切片机（ultramicrotome）切成超薄切片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。要在机体死亡后的数分钟钓取材，组织块要小(1立方毫米以内），常用戊二醛和饿酸进行双重固定树脂包埋,用特制的超薄切片机（ultramicrotome）切成超薄切片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。电子束投射到样品时，可随组织构成成分的密度不同而发生相应的电子发射，如电子束投射到质量大的结构时，电子被散射的多，因此投射到荧光屏上的电子少而呈暗像，电子照片上则呈黑色。电子束投射到样品时，可随组织构成成分的密度不同而发生相应的电子发射，如电子束投射到质量大的结构时，电子被散射的多，因此投射到荧光屏上的电子少而呈暗像，电子照片上则呈黑色。称电子密度高（electrondense）。称电子密度高（electrondense）。反之，则称為电子密度低（electronlucent）。反之，则称为电子密度低（electronlucent）。

2。扫描电镜术扫描电镜术
扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描，将產生的二次电子用特制的探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体。扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描，将产生的二次电子用特制的探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体。（细胞、组织）表面的立体构像，可摄制成照片。（细胞、组织）表面的立体构像，可摄制成照片。

扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定，经脱水和临界点干燥后,再於样品表面喷镀薄层金膜，以增加二波电子数。扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定，经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜，以增加二波电子数。扫描电镜能观察较大的组织表面结构，由於它的景深长，1mm左右的凹凸不平面能清所成像，故放样品图像富有立体感。扫描电镜能观察较大的组织表面结构，由于它的景深长，1mm左右的凹凸不平面能清所成像，故放样品图像富有立体感。

1、光学显微镜以可见光为介质，电子显微镜为电子束為介质，由於电子束波长远较可见光小，故电子显微镜解析度远比光学显微镜高。光学显微镜以可见光为介质，电子显微镜为电子束为介质，由于电子束波长远较可见光小，故电子显微镜解析度远比光学显微镜高。光学显微镜放大倍率最高只有约1500倍，扫描式显微镜可放大到10000倍以上。光学显微镜放大倍率最高只有约1500倍，扫描式显微镜可放大到10000倍以上。

2.根据deBroglie波动理论，电子的波长仅与加速电压有关：根据deBroglie波动理论，电子的波长仅与加速电压有关：λe＝h/mv＝h/(2qmV)1/2＝12.2/(V)1/2(?)λe＝h/mv＝h/(2qmV)1/2＝12.2/(V)1/2(?)在10KV的加速电压之下，电子的波长仅為0.12?，远低於可见光的4000-7000?，所以电子显微镜解析度自然比光学显微镜优越许多，但是扫描式电子显微镜的电子束直径大多在50-100?之间，电子与原子核的弹性散射(ElasticScattering)与非弹性散射(InelasticScattering)的反应体积又会比原有的电子束直径增大，因此一般穿透式电子显微镜的解析度比扫描式电子显微镜高。在10KV的加速电压之下，电子的波长仅为0.12?，远低于可见光的4000-7000?，所以电子显微镜解析度自然比光学显微镜优越许多，但是扫描式电子显微镜的电子束直径大多在50-100?之间，电子与原子核的弹性散射(ElasticScattering)与非弹性散射(InelasticScattering)的反应体积又会比原有的电子束直径增大，因此一般穿透式电子显微镜的解析度比扫描式电子显微镜高。

3.扫描式显微镜有一重要特色是具有超大的景深（depthoffield），约為光学显微镜的300倍，使得扫描式显微镜比光学显微镜更这合观察表面起伏程度较大的试片。扫描式显微镜有一重要特色是具有超大的景深(depthoffield)，约为光学显微镜的300倍，使得扫描式显微镜比光学显微镜更适合观察表面起伏程度较大的试片。

4.扫描式电子显微镜，其系统设计由上而下，由电子枪(ElectronGun)发射电子束，经过一组磁透镜聚焦(Cond
enserLens)聚焦后，用遮蔽孔径(CondenserAperture)选择电子束的尺寸(BeamSize)后，通过一组控制电子束的扫描线圈，再透过物镜（ObjectiveLens）聚焦，打在试片上，在试片的上侧装有讯号接收器，用以择取二次电子(SecondaryElectron)或背向散射电子(BackscatteredElectron)成像。扫描式电子显微镜，其系统设计由上而下，由电子枪(ElectronGun)发射电子束，经过一组磁透镜聚焦(CondenserLens)聚焦后，用遮蔽孔径(CondenserAperture)选择电子束的尺寸(BeamSize)后，通过一组控制电子束的扫描线圈，再透过物镜(ObjectiveLens)聚焦，打在试片上，在试片的上侧装有讯号接收器，用以择取二次电子(SecondaryElectron)或背向散射电子(BackscatteredElectron)成像。

5.电子枪的必要特性是亮度要高、电子能量散佈(EnergySpread)要小，目前常用的种类计有三种，钨(W)灯丝、六硼化鑭(LaB6)灯丝、场发射(FieldEmission)，不同的灯丝在电子源大小、电流量、电流稳定度及电子源寿命等均有差异。电子枪的必要特性是亮度要高、电子能量散布(EnergySpread)要小，目前常用的种类计有三种，钨(W)灯丝、六硼化镧(LaB6)灯丝、场发射(FieldEmission)，不同的灯丝在电子源大小、电流量、电流稳定度及电子源寿命等均有差异。

光学显微镜	卵子	沥青	视网膜	蔗糖素
磷酸	染色质	氢氧化钠	酚酞	糖精
癌细胞	染色体	煤油	酱油	冰糖
细胞分裂	蓝宝石	石蜡	免疫细胞	二氧化硅
精子	氟里昂	干燥剂	红糖	高锰酸钾

1、http://www.malvern.com.cn/Labchi/products/morphologi/particle_image_analyzer.htm
2、http://www.cinv.cn/
3、http://www.cc.ntut.edu.tw/~mnslab/ZEISS-Microscope-Specs.doc