免疫佐剂

免疫佐剂又称非特异性免疫增生剂，本身不具有抗原性，但与抗原一起或预先注射到机体内，能增强免疫原性或改变免疫反应类型。目前尚无统一的分类方法，常用佐剂可分为四类：

• 无机佐剂：如氢氧化铝、明矾等；
• 有机佐剂：微生物及其产物，如分枝杆菌（结核杆菌、卡介苗）、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物（胞壁酰二肽）等；
• 合成佐剂：如人工合成的双链多聚核苷酸（双链多聚腺苷酸、尿苷酸）、左旋咪唑、异丙肌苷等；
• 油剂：如弗氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等。

弗氏佐剂目前在实验动物中最常用，又可分为弗氏不完全佐剂和完全佐剂两种。不完全佐剂是油剂（石蜡油或植物油）与乳化剂（羊毛脂或吐温80）相混合而成，与抗原混合后形成油包水乳剂，可用于免疫注射。在不完全佐剂中加入死的分枝杆菌，即成为弗氏完全佐剂。完全佐剂的免疫强度大于不完全佐剂。该佐剂主要用于动物实验，不适宜人类使用，且动物多次注射后常会发生佐剂病。

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免疫佐剂的生物作用包括：

1. 抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，使抗原物质缓慢释放，延长抗原的作用时间；
2. 佐剂吸附抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；
3. 佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；
4. 佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；
5. 可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体，使无免疫原性物质变成有效的免疫原；
6. 提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度；
7. 改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。

作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件： ADFASDFAF23RQ23R

• 增加抗原的表面积，改变抗原的活性基团构型，增强抗原的免疫原性；
• 与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，减低抗原分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体；
• 直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，增强体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能；
• 具有无毒性或副作用低的特点。

佐剂主要可分为两种：一种本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、抗酸杆菌（结核分枝杆菌）以及革兰阴性杆菌等；另一种本身无免疫原性，如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。目前应用最多的是弗氏佐剂。 ADSFAEQWER353423413434

弗氏佐剂

弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比通常为2:1。不完全佐剂中加卡介苗（最终浓度2-20 mg/ml）或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。首次注射时用1/2体积FCA加上1/2体积抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂，如不加佐剂则抗原量增大10-20倍。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波混匀，高压灭菌，4℃保存备用。免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按1:1体积比混合，制备成油包水乳状液。抗原用量视抗原分子量及免疫原性而定，一般每兔（约2 kg）首次注射1 mg，以后逐次增加，最多每次不超过3 mg。 ADFASDFAF23RQ23R

乳化方法： ADSFAEQWER353423413434

• 研磨法：将佐剂加热后放入无菌玻璃研钵，冷却后缓缓滴入等体积抗原溶液，边滴边同方向研磨，至乳白色粘稠油包水乳剂。适于制备大量佐剂，但抗原损失较大。
• 注射器混合法：等量弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器，用细胶管相连，交替推动直至形成粘稠乳剂。优点是无菌操作，抗原损失少，但乳化可能不完全。
• 超声法：控制超声频率和时间，避免自由基损害抗原。

鉴定方法：将乳化剂滴入冷水，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全。

氢氧化铝佐剂

取5%硫酸铝溶液250 ml，强烈搅拌下加入5%氢氧化钠溶液100 ml，用生理盐水离心洗涤沉淀2次，再悬入生理盐水中达250 ml。免疫接种时取适量氢氧化铝佐剂加等体积抗原即可。

明矾佐剂

钾铝矾（硫酸铝钾）在一定pH条件下产生氢氧化铝胶体吸附抗原。用生理盐水溶解蛋白质抗原，搅拌下缓慢滴入10%硫酸铝钾溶液，用NaOH调pH至6.5，形成乳状悬液，离心后沉淀用生理盐水洗涤二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存。明矾佐剂一般用于肌肉注射，皮下注射易引起肉芽肿和脓肿。 ADFASDFAF23RQ23R

脂质体

脂质体包封抗原后，使抗原延缓释放，且脂质体颗粒有刺激机体免疫反应的作用，因此用脂质体包封抗原免疫动物可提高免疫效果。

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免疫佐剂在疫苗研发和免疫学研究中具有重要作用，新型佐剂如脂质体、纳米颗粒等不断开发，旨在提高免疫效果的同时降低副作用。未来佐剂研究将朝着更安全、更高效的方向发展。 ADFASDFAF23RQ23R

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