外周血单个核细胞

注：PBMC不含粒细胞（中性粒/嗜酸/嗜碱）和红细胞（成熟红细胞无核，血小板无完整核）。

操作步骤（关键细节）

1. 抗凝采血：静脉血+EDTA/肝素抗凝（防凝固）。

2. 稀释：血液: PBS = 1:1稀释（降低粘度）。

3. 加样离心：缓慢叠加稀释血于Ficoll-Paque™（密度1.077 g/mL）上层；水平离心：400 ×g, 20-22℃, 30分钟（无刹车！）。

4. 分层收获：离心后分层（自上而下）：血浆/血小板 ──── PBMC白膜层（目标） ──── Ficoll ──── 粒细胞/红细胞沉淀。吸出白膜层（PBMC+少量血小板）。

5. 洗涤：PBS洗2次（1500rpm, 10分钟）→ 去除残留Ficoll/血小板。

成功率指标

• 细胞活性：>95%（台盼蓝染色验证）；
• 得率：健康成人全血约1×10⁶ PBMC/mL；
• 纯度：流式检测CD45⁺（泛白细胞标记）>98%。

1. 免疫学研究

2. 临床诊断

• 感染性疾病：HIV患者CD4⁺ T细胞计数（＜200/μL→艾滋病期）；EB病毒/CMV特异性T细胞检测（ELISPOT）。
• 自身免疫病：类风湿关节炎患者Th17比例升高（IL-17⁺细胞↑）。

3. 细胞治疗

• CAR-T疗法：分离患者PBMC → 基因编辑T细胞（靶向CD19等）→ 回输治疗白血病；
• 树突细胞疫苗：单核细胞→体外诱导为DC→负载肿瘤抗原→回输激活T细胞。

4. 药物开发

• 免疫毒性评估：药物处理PBMC → 检测细胞凋亡/线粒体损伤（预测肝毒性）；
• 疫苗效力测试：接种后PBMC抗原特异性应答强度（如新冠疫苗中和抗体+T细胞反应）。

• 短期：4℃ RPMI 1640培养基（含10% FBS）→ 存活≤48小时；
• 长期：程序降温：添加10% DMSO → 液氮冻存（-196℃）；复苏：37℃水浴速融 → DNase处理防聚集。
• 运输：干冰（冻存）或室温冷链（新鲜样本，用专用培养基如LymphoSeal™）。

PBMC是免疫系统的核心侦察兵：组成：淋巴细胞（T/B/NK） + 单核细胞 → 覆盖适应性/固有免疫；分离：Ficoll密度梯度离心法为金标准，需严格控参数保纯度；应用：基础研究（免疫应答机制解析）、临床诊断（感染/免疫疾病监控）、治疗前沿（CAR-T/DC疫苗载体）。关键提示：样本处理速度决定细胞活性！采血至分离间隔应＜4小时，避免粒细胞活化干扰。

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