薄层层析

 

　　又称薄层色谱。是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0.25毫米左右）后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。
　　分析程序 　将样品溶液用毛细管点在薄层板的一端，置密闭槽中，加入适宜溶剂为流动相。由于毛细管作用，溶剂被吸上，沿板移动，并带动样品中各组分向前移动，这个过程称为展开。由于各组分性质不同，移动距离不同，展开一定距离后，即得互相分离的组分斑点。可用适当方法使各组分在板上显示其位置，如组分本身有颜色，即可直接观察，否则可喷显色试剂或在紫外灯下观察荧光等办法确定斑点位置。通常用比移值(R_f)表示组分移动的特性，其定义为： 在流动相、固定相和展开条件固定时，R_f值是组分的特性，可用以进行定性鉴别。实用时也常将样品与已知纯物质同时展开，比较二者移动情况，进行定性分析。
　　定量方法 　可分为洗脱测定法和原位扫描法：
　　①洗脱测定法，将展开后的组分斑点处的吸附剂刮下，用适宜溶剂将组分洗脱溶出，然后用适当方法进行定量测定。常用方法为比色法、紫外-可见分光光度法，也可用电化学分析法等。
　　②原位扫描法，将展开后的薄层板放在光密度计内，以一定波长的光照射，同时使斑点移过光路，由于斑点对光的吸收，可绘出峰形曲线，由峰面积与标准样品的吸收相比较而求出含量。
　　薄层层析法以吸附层析使用最为普遍。常用的吸附剂为硅胶、氧化铝等。薄层层析和其他层析法一样，除吸附法外，也可进行分配、离子交换、分子排阻等机理的层析，即将铺制薄层的材料相应换为涂以固定相的载体、离子交换剂、凝胶等，其操作与吸附法基本相同。
　　制板 　铺制薄层板时，要求基底板洁净平整，可用干法或湿法铺制。现常用湿法制板，即将吸附剂和粘合剂（如烧石膏）按一定比例混合，加入适量水调匀，用涂布器将此匀浆缓慢地移过基底板，放置晾干，再经适当烘烤活化后即可使用。如不加粘合剂和水，直接将吸附剂均匀地铺成薄层，则为干法制板。现在市场上已有各种制好的薄层板出售，统称预制板。
　　展开 　有多种方式，以上行法最为常用。将薄层板垂直或倾斜放置，将展开溶剂加于低部，使之自下向上移动。下行法则为用滤纸将溶剂引至薄层上端，使其自上向下流动。平行展开时，将板平放，溶剂被吸上至薄层板点有样品的一端,进行展开。使用圆形薄层板时,将样品点在圆心附近，使溶剂自圆心向圆周方向移动，称为环形展开或径向展开；将样品点在圆周位置，使溶剂自圆周向圆心移动的为向心展开，适用于R_f值大的组分的分离。将点样品处附近的吸附剂刮去，使溶剂只能通过样品点附近的较窄部分前进展开，因而溶剂前缘呈弧形的展开方式，也称径向展开，这种方式对较难分离的组分可能效果好些。
　　展开一次后取出薄层板使溶剂挥发，再用同一溶剂或换用其他溶剂再次沿此方向展开的称多次展开。将样品点在方形薄层板的一角，先沿着一个方向展开，然后将板转动90°，再沿着另一方向展开的为双向展开。多次展开和双向展开都可加强分离效果。
　　特点 　操作简便，设备简单，除光密度计外，不需特殊设备，分离效果较好，时间较短，一块板上可同时分离许多样品。除低沸点物质外，各种无机和有机化合物都可进行分离。
　　应用和发展 　广泛应用于石油、化工、医药、生化等方面。样品用量一般为几至几百微克，是一种较实用、有效的微量分离分析方法。此法也可用于分离制备较大量的样品，即使用较大较厚的薄层板，将样品溶液在起始点处点成条带状，这样可以分离毫克量样品。
　　高效液相色谱法是用微细颗粒得到高效分离的办法，也已用于薄层层析。使用5～10微米的吸附剂制板,可得较好的分离效果,为与一般的薄层层析法相区别,称为高效薄层层析。其优点是样品量少(只需纳克量样品)、展开距离小、展开时间短，是薄层层析法的一个重要发展。