琼脂平板

琼脂平板（Agar Plate）是一种用于微生物培养的固体培养基，由 琼脂（Agar） 和 营养成分 组成，广泛用于细菌、真菌等微生物的分离、纯化与鉴定。以下是其制备、应用及常见问题的系统解析：

一、基本组成与配方

1. 凝固剂：

   • 琼脂：从红藻（如石花菜）提取的多糖，浓度通常为1.5%-2%（高温溶解，40℃以下凝固）。

2. 基础培养基（以LB琼脂为例）：

   • 蛋白胨（10 g/L）：提供氮源、氨基酸。

   • 酵母提取物（5 g/L）：提供维生素、微量元素。

   • NaCl（10 g/L）：维持渗透压。

   • 琼脂（15 g/L）：凝固作用。

3. 选择性/鉴别添加剂：

   • 抗生素（如氨苄青霉素）：筛选转化子。

   • 显色底物（如X-Gal）：蓝白斑筛选（用于基因克隆）。

   • pH指示剂（如酚红）：鉴别发酵产酸（如EMB琼脂区分大肠杆菌）。

二、制备流程

1. 称量与溶解：

   • 按配方称量各成分，加入蒸馏水搅拌溶解（可加热至沸点助溶）。

2. 灭菌：

   • 高压蒸汽灭菌：121℃、15-30分钟（液体培养基需灭菌后加琼脂）。

3. 倒平板：

   • 灭菌后冷却至约50℃（手握不烫），无菌操作倒入培养皿（直径9 cm皿约20 mL）。

   • 凝固后倒置存放，防止冷凝水积聚。

三、主要应用场景

四、常见问题与解决

1. 琼脂不凝固：

   • 原因：琼脂浓度不足、pH过低（酸性降解琼脂）。

   • 解决：调整琼脂至1.5%-2%，检查培养基pH（中性为宜）。

2. 污染：

   • 原因：灭菌不彻底、倒板环境有菌。

   • 解决：验证灭菌程序，使用生物安全柜操作。

3. 冷凝水过多：

   • 原因：高温封膜或未倒置储存。

   • 解决：凝固后立即倒置，避免堆叠。

五、储存与保质期

• 未接种平板：密封后4℃保存，有效期2-4周（干燥或污染后废弃）。

• 接种后平板：根据微生物生长需求，通常37℃培养18-24小时（细菌）或25℃培养3-7天（真菌）。

六、安全注意事项

1. 生物危害：

   • 处理病原微生物时需在BSL-2以上实验室操作。

   • 废弃平板需高压灭菌（121℃、30分钟）后丢弃。

2. 个人防护：

   • 穿戴实验服、手套，操作后彻底洗手。