Vero细胞

Vero细胞系源自非洲绿猴（Chlorocebus sabaeus，旧称Cercopithecus aethiops）的肾组织，具体由日本千叶大学的研究者Yasumura和Kawakita于1962年从正常成年猴肾中分离获得。这一细胞系的建立解决了原代猴肾细胞培养中细胞寿命短、批次差异大等问题，提供了可长期传代且性质均一的细胞基质。Vero细胞系在建立初期通过连续传代实现永生化，其倍增时间约为24小时，在含10%胎牛血清的培养基中生长迅速。

Vero细胞为贴壁生长的上皮样细胞，形态均一，呈多边形或梭形，传代后单层铺展。其染色体核型分析显示，模型Vero细胞具有60条染色体（2n=60），包括1条大型亚中着丝粒染色体（标记染色体），核型相对稳定但存在端粒融合现象。基因组研究表明，Vero细胞系存在p53基因突变和p16INK4a基因缺失，导致细胞周期调控异常，赋予其无限增殖能力。此外，Vero细胞缺乏功能性I型干扰素（IFN）基因簇，无法有效产生干扰素α/β，这一特性使其对多种病毒高度易感，成为理想的病毒培养基质。

Vero细胞的常规培养使用MEM或DMEM培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、2 mM L-谷氨酰胺和1%非必需氨基酸（NEAA），在37°C、5% CO₂湿润环境中培养。传代时以0.25%胰蛋白酶-EDTA消化，按1:3至1:6比例传代。质量控制需定期检测支原体污染、染色体核型及成瘤性。WHO和FDA规定用于疫苗生产的Vero细胞工作种子库必须在限定代次内使用（通常不超过150代），以确保细胞遗传稳定性并降低致瘤风险。

Vero细胞系对多种人及动物病毒具有广谱易感性，包括狂犬病病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒71型、SARS-CoV-2等，是病毒分离、滴定及疫苗生产的关键基质。其中，Vero细胞在狂犬疫苗生产中应用最为成熟，通过微载体培养技术实现大规模悬浮培养，疫苗病毒滴度可达10^7 PFU/mL以上。此外，Vero细胞也用于生产灭活脊髓灰质炎疫苗（IPV）、埃博拉病毒疫苗及重组流感疫苗。在COVID-19大流行期间，Vero细胞被广泛用于新冠病毒的分离、中和抗体检测及灭活疫苗研发。

凭借干扰素缺陷特性，Vero细胞在病毒学研究领域具有不可替代的价值：用于研究病毒与宿主细胞的相互作用、病毒复制机制、抗病毒药物筛选及中和抗体检测。例如，Vero细胞在鉴定SARS-CoV-2受体（ACE2）依赖性入侵机制中发挥关键作用；在克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）研究中，Vero细胞被用于评估新型抗病毒化合物效果。此外，Vero细胞还广泛用于制备病毒标准株和感染性克隆。

尽管Vero细胞系被WHO认可为疫苗生产基质，但其作为永生化细胞系存在潜在的致瘤性风险。研究显示，高代次Vero细胞（>200代）在裸鼠中可形成肿瘤，可能与c-myc基因过表达有关。因此，生产用Vero细胞工作种子库需严格限定代次，通过成瘤性试验、肿瘤基因表达谱分析及全基因组测序进行安全性评估。伦理方面，Vero细胞源自动物组织，虽不涉及人类胚胎或伦理争议，但需遵循动物福利原则，减少实验动物的使用。

Vero细胞与来源于非洲绿猴的COS-7细胞（SV40转化的肾成纤维细胞）及BHK-21细胞（仓鼠肾成纤维细胞）在病毒培养中各有优势。Vero细胞因干扰素缺陷对单链RNA病毒更敏感；COS-7细胞可表达SV40T抗原，适用于复制缺陷型病毒载体；BHK-21细胞则常用于狂犬病疫苗和口蹄疫病毒培养，但其干扰素系统正常，病毒易感性较低。

随着基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）的发展，工程化Vero细胞系被设计以增强特定病毒产量或表达重组蛋白。例如，敲除凋亡相关基因（如Bak/Bax）的Vero细胞可延长病毒感染周期，提高蛋白表达量。此外，无血清悬浮培养工艺的优化使Vero细胞在生物反应器中密度超过10^7 cells/mL，为新型疫苗（如mRNA疫苗）的生产提供替代方案。然而，需持续监测其传代过程中的基因组变异，确保生物安全性。

• Yasumura Y, Kawakita Y. Studies on SV40 in tissue culture: preliminary step for cancer research in vitro. Nihon Rinsho. 1963;21:1201-1215.
• Kano Y, Kobayashi H, Yamamoto Y, et al. Chromosomal characteristics of Vero cells: a cytogenetic study. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1996;32(1):18-22.
• Osada N, Kohara M, Yamaji T, et al. The genome sequence of the African green monkey kidney-derived Vero cell line. Sci Rep. 2014;4:6820.
• World Health Organization. WHO Recommendations for the production and control of vaccines prepared in Vero cells. WHO Technical Report Series. 2013;978:1-58.
• Montomoli E, Khadang B, Piccirella S, et al. Cell culture-derived influenza vaccines: from Vero cells to MDCK cells. Expert Rev Vaccines. 2012;11(5):581-594.
• Barrett PN, Mundt W, Kistner O, et al. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines. Expert Rev Vaccines. 2009;8(5):607-618.
• Amako K, Ushijima H, Takami R, et al. Interferon sensitivity of Vero cells and its application to virus isolation. J Virol Methods. 2008;150(1-2):41-45.
• Feng M, Zhao J, Liang J, et al. Evaluating the safety of high-passage Vero cells used in vaccine production by whole-genome sequencing. Vaccine. 2020;38(25):4059-4066.