丹磺酰氯
丹磺酰氯（Dansyl Chloride，DNS-Cl）详解
1. 化学结构与基本信息
化学名称：5-(二甲氨基)萘-1-磺酰氯
分子式：C₁₂H₁₂ClNO₂S
结构式：
（萘环的1位为磺酰氯基，5位为二甲氨基）
2. 物理性质
外观：白色至淡黄色结晶性粉末
溶解性：
易溶于极性有机溶剂（如DMF、DMSO、乙腈）
微溶于水（需在碱性条件或含胺溶液中溶解）
熔点：约60-65°C
荧光特性：
激发波长：约330-350 nm
发射波长：约500-550 nm（强绿色荧光）
3. 化学性质
高反应性：磺酰氯基团（-SO₂Cl）易与氨基（-NH₂）、羟基（-OH）等亲核基团反应。
典型反应：
与氨基反应：生成稳定的磺酰胺键（-SO₂-NR₂），用于标记蛋白质或多肽的N端氨基酸。
水解敏感性：水中缓慢水解为磺酸（需干燥保存）。
4. 核心应用
4.1 蛋白质与多肽分析
Edman降解：
标记多肽的N端氨基，通过逐级切割鉴定氨基酸序列。
步骤：
DNS-Cl与N端氨基反应生成丹磺酰化多肽。
酸水解切除标记的氨基酸。
通过HPLC或TLC鉴定丹磺酰-氨基酸。
荧光标记：
标记蛋白质的游离氨基（如赖氨酸侧链），用于荧光显微镜或SDS-PAGE检测。
4.2 小分子检测
胺类物质分析：
标记生物胺（如组胺、多巴胺），通过HPLC-荧光检测定量（灵敏度达pmol级）。
药物代谢研究：
标记含氨基代谢物，追踪其在体内的分布与清除。
4.3 材料科学
荧光探针合成：
与含氨基的分子（如壳聚糖、纳米颗粒）偶联，制备生物相容性荧光标记材料。
5. 实验操作要点
标记反应条件：
pH：8-9（碳酸盐缓冲液或三乙胺调节）。
温度：室温或37°C，避光反应1-2小时。
摩尔比：DNS-Cl: 氨基 ≈ 5:1（过量DNS-Cl确保完全反应）。
纯化方法：
透析：去除未反应的DNS-Cl（适用于大分子标记）。
柱层析：硅胶柱分离小分子标记产物。
6. 注意事项与安全
毒性：
对皮肤、眼睛有刺激性，操作时需戴手套、护目镜，在通风橱中进行。
储存：
避光、干燥、-20°C密封保存（易吸潮水解）。
废弃物处理：
按有机卤化物废液处理，避免直接排放。
7. 常见问题解答
Q：丹磺酰氯标记后荧光强度低？
A：可能原因：
反应pH过低（需≥8）。
氨基浓度不足（提高DNS-Cl比例）。
光照导致荧光淬灭（全程避光操作）。
Q：如何区分N端标记与内部赖氨酸标记？
A：
Edman降解：仅N端氨基被标记并逐级切除。
质谱分析：通过分子量差异确定标记位点。
Q：丹磺酰氯与其他磺酰化试剂的区别？
A：
荧光特性：丹磺酰基具有强荧光，而其他试剂（如Dabsyl-Cl）依赖显色检测。
灵敏度：丹磺酰标记的检测限更低（荧光法 vs. 紫外法）。
8. 替代与衍生试剂
Dabsyl-Cl：用于无荧光需求的紫外检测（吸收波长460 nm）。
FITC（异硫氰酸荧光素）：替代荧光标记，但反应位点为氨基，发射波长不同（520 nm）。
磺基-NHS酯：更稳定的水溶性活化酯，适用于生物共轭。
总结：丹磺酰氯凭借其强荧光与高反应性，成为蛋白质测序和小分子检测的重要工具。精准控制反应条件与纯化步骤，可最大化其应用效能，尤其在微量分析中展现独特优势！
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