核酸杂交技术

  核酸杂交技术是一种分子生物学的标准技术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼农膜上，与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。 　　DNA印迹杂交（Southern blot）RNA印迹杂交(Northern blot)
　　1、DNA印迹杂交（DNA blot hybridization）有两种核酸印迹法：
　　·将DNA或RNA溶液直接点样于硝酸纤维素膜或尼农膜上（斑点或狭线印迹）
　　·经琼脂糖凝胶电泳将片段的DNA或RNA转移到膜上（Southern和Northern印迹法）。DNA在电泳前先用限制性内切酶消化。
　　2、RNA印迹杂交（RNA blot hybridization）：
　　·RNA印迹杂交是一种检测已固定在滤膜上的总RNA或mRNA特定靶序列的技术。
　　（一）斑点杂交
　　将少量核酸样品点样在硝酸纤维素滤膜上，80℃烘烤后可牢固地固定在膜上，再用探针进行杂交。尼龙膜，特别是聚偏氟乙烯（PVDF）与DNA结合力更高，坚韧、易操作。点样可手工，也可用手工点样品。检测可用放射性探针自显影或非放射性探针显色。可用于DNA或RNA分析。
　　（二）原位杂交
　　在保持细胞形态条件下，进行细胞内杂交，显影或显色。可用于DNA或RNA分析。荧光原位杂交（FISH）进行染色体DNA分析可用于生物学研究的许多领域以及临床细胞遗传学研究。其主要优点是不仅可以在细胞分裂的中期，而且可在分裂间期核中诊断染色体的变化。