二氢链霉素

二氢链霉素和链霉素为分析目标化合物，同时包括壮观霉素和新霉素。

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高效液相色谱—质谱仪。

除附录2所列试剂外，使用以下试剂：

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• 七氟丁酸：七氟正丁酸
• 庚磺酸钠：1－庚磺酸钠（特级）

• 盐酸壮观霉素：本品1.000 mg含603 μg以上效价的壮观霉素。
• 硫酸二氢链霉素：本品1.000 mg含720 μg以上效价的二氢链霉素。
• 硫酸链霉素：本品1.000 mg含718 μg以上效价的链霉素。
• 硫酸新霉素：本品1.000 mg含680 μg以上效价的新霉素。

a 提取方法

① 肌肉、脂肪、肝脏和肾脏 ADSFAEQWER353423413434

肌肉：尽可能除去脂肪，搅碎混合均匀后，称取其5.00 g。
脂肪：尽可能除去肌肉，搅碎混合均匀后，称取其5.00 g。
肝脏和肾脏：搅碎混合均匀后，称取其5.00 g。 ADFASDFAF23RQ23R

加入25 mL 1%的偏磷酸溶液，搅拌3分钟后，以每分钟3000转离心分离10分钟，脱脂棉过滤。 ADSFAEQWER353423413434

② 奶

称取5.00 g样品，加入25 mL 1%的偏磷酸溶液，搅拌3分钟后，用振荡器激烈振荡5分钟，以每分钟3000转离心分离10分钟，脱脂棉过滤。

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③ 蛋

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除去蛋壳，充分均匀后，称取其5.00 g，加入25 mL 1%的偏磷酸溶液，搅拌均匀后，以每分钟3000转离心分离10分钟，脱脂棉过滤。 ADFASDFAF23RQ23R

b 净化方法

在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱（500 mg）中，依次注入5 mL甲醇和10 mL水，弃去流出液。柱中依次注入a提取方法所得到的溶液和5 mL水，流出液中加入2 mL 0.1 mol/L庚磺酸钠。柱中再依次注入5 mL甲醇和10 mL水，弃去流出液。依次注入前面加入了庚磺酸钠的溶液和5 mL水，弃去流出液。柱中注入10 mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去甲醇。残留物中加入1.0 mL乙腈:0.005 mol/L七氟丁酸溶液（1:9）混合溶液溶解，此为试验溶液。

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a 定性试验

按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。

操作条件 ADSFAEQWER353423413434

• 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶。
• 柱：内径1.0～6.0 mm、长10～150 mm不锈钢管。
• 柱温：40℃
• 流动相：乙腈:0.005 mol/L七氟丁酸溶液（1:9）混合溶液。调整流速使壮观霉素约10分钟流出。

b 定量试验

根据与a定性试验相同的试验条件所得的试验结果，采用峰高法或峰面积法定量。

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• 二氢链霉素：0.02 mg/kg
• 链霉素：0.02 mg/kg
• 壮观霉素：0.02 mg/kg
• 新霉素：0.02 mg/kg

（1）试验溶液的制备

净化方法采用的十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱，应预先采用标准品在保证确定的保持、溶出性能和净化效果时，确证二氢链霉素定量限在0.02 mg/kg以下；链霉素定量限在0.02 mg/kg以下；壮观霉素定量限在0.02 mg/kg以下；新霉素定量限在0.02 mg/kg以下。另外，用标准品进行添加回收试验，确证十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱的净化效果和回收率（90～100%）。

（2）标准溶液的制备

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• ① 将相当于二氢链霉素10.0 mg（效价）的标准品溶解在水中，作为二氢链霉素的标准原液（二氢链霉素100 mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。
• ② 将相当于链霉素10.0 mg（效价）的标准品溶解在水中，作为链霉素的标准原液（链霉素100 mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。
• ③ 将相当于壮观霉素10.0 mg（效价）的标准品溶解在水中，作为壮观霉素的标准原液（壮观霉素100 mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。
• ④ 将相当于新霉素10.0 mg（效价）的标准品溶解在水中，作为新霉素的标准原液（新霉素100 mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。
• ⑤ 用甲醇递减稀释二氢链霉素、链霉素、壮观霉素和新霉素各标准原液，作为制作标准曲线的标准溶液。

• 中华人民共和国农业行业标准. 动物源性食品中二氢链霉素、链霉素、壮观霉素和新霉素残留量的测定 高效液相色谱-质谱法[S]. 2008.
• U.S. Food and Drug Administration. Dihydrostreptomycin: Chemical and Biological Information[EB/OL]. https://www.fda.gov/.
• 张智, 等. 高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中二氢链霉素和链霉素残留[J]. 分析化学, 2010, 38(5): 727-730.
• Sciensano. Dihydrostreptomycin: Residues in Food of Animal Origin[EB/OL]. https://www.sciensano.be/.