乙酰乳糖胺重复结构

简单介绍:

多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是催化0-糖链起始反应的第一步酶，其活性与肿瘤密切有关。本文旨在建立酵母双杂交技术平台，并对多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2结构与功能关系进行初步研究。方法：1．利用PDB数据库寻找 GalNAcT2模版，并用SWI -MODEL服务器对 GalNAcT2进行空间结构模拟，对结果进行优化及PROCHECK检测。2．利用PCR方法重组构建pGADT7一T2、pC-ADTT-T2F、pGADT7一T2R酵母双杂交载体，醋酸锂法转化酵母AHl09菌株，并进行激活检测。3．利用RT—PCR方法从人类胃癌SGC7901细胞中克隆出基质金属蛋白酶14的铰链区，并用酵母双杂交方法验证 GalNAcT2与MMPl4的铰链区结构相互作用。结果：成功对 GalNAcT2进行同源模拟。构建了pGADT7一T2、pGADT7-T2F、pGADT7一T2R酵母双杂交载体，并通过激活检测，建立酵母双杂交技术平台。从SGC7901细胞中克隆出MMPl4铰链区结构，构建了MMPl4H-putf8T7载体，对 GalNAcT2和IVlMPl4铰链区进行酵母双杂交验证，结果成阴性。结论： GalNAcT2催化区包括三个结构域。 GalNAcT2通过激活检测，能够用于酵母双杂交实验。 GalNAcT2与MMPl4铰链区酵母双杂交实验的阴性结果表明， GalNAcT2作为蛋白质与~VIPl4铰链区可能无稳定的相互结合作用：但是作为一个酶，是否催化MMPl4铰链区的0一糖基化，有待于进一步的深入研究。 关键字:糖基转移酶,同源模拟,酵母双杂交,激活检测,基质金属蛋白酶,基因克隆,肿瘤转移

人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域的折叠识别和结构模拟
  丁向明;金美芳;仇灏;姜智;吴士良
  　　目的 对人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域进行三维结构预测。方法 利用网络结构模拟SWISS-MODEL服务器进行结构模拟。结果 发现其采用的是β-三叶草折叠方式,二级结构主要为β链,通过与模板蛋白的结构比较,对其可能的活性位点进行了预测。结论 该酶具有蓖麻蛋白样结构域。
【作者单位】：苏州大学医学院生物化学与分子生物学教研室苏州大学生物化学工程研究所 江苏苏州215007 (丁向明;金美芳;仇灏;姜智);苏州大学医学院生物化学与分子生物学教研室苏州大学生物化学工程研究所 江苏苏州215007(吴士良)
【关键词】：结构模拟;蓖麻蛋白样结构域;SWISS-MODEL
【基金】：苏州大学医学发展基金资助(2003007)
【分类号】：Q51
【DOI】：cnki:ISSN:1000-5749.0.2004-05-007
【正文快照】：
　　人类多肤:N一乙酞氨基半乳糖转移酶(pp-Ga1NAc-T)是粘蛋白O一糖基化的起始酶,转移GalNA。至粘蛋白,结构上可分为3个独立的结构域:GTI结构域、Gal/GalNAc一T结构域和C末端的蓖麻蛋白样结构域。过去人们一直认为前两个结构域是催化结构域,在酶的催化活性上起着不可或缺的作用