亮蓝G

亮蓝G‌（Brilliant Blue G）：

‌1. 基本信息‌

• ‌化学名称‌：考马斯亮蓝G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）
• ‌CAS号‌：6104-58-1
• ‌分子式‌：C₄₇H₄₈N₃NaO₇S₂
• ‌外观‌：深蓝色粉末，溶于水或乙醇后呈蓝色溶液。
• ‌特性‌：
  • 酸性条件下与蛋白质的碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）结合，形成蓝色复合物。
  • 最大吸收波长：595 nm（用于比色定量）。

‌2. 主要应用‌

‌（1）蛋白质染色（SDS-PAGE凝胶染色）‌

• ‌原理‌：通过非共价键结合蛋白质，掩盖蛋白质本身的电荷差异，使染色均匀。
• ‌步骤‌：
  1. 将凝胶浸泡在含0.1%亮蓝G的染色液（40%甲醇、10%乙酸）中，摇动30分钟。
  2. 脱色：用脱色液（40%甲醇、10%乙酸）洗去未结合的染料，直至背景透明。
• ‌灵敏度‌：可检测低至1 μg的蛋白质条带。

‌（2）Bradford法测定蛋白质浓度‌

• ‌原理‌：染料在酸性溶液中呈棕色，与蛋白质结合后变为蓝色，吸光度与蛋白质浓度成正比。
• ‌试剂配制‌：
  • Bradford工作液：0.01%亮蓝G-250、4.7%乙醇、8.5%磷酸。
• ‌操作流程‌：
  1. 取待测样品与Bradford工作液混合，室温静置5分钟。
  2. 测定595 nm吸光度，通过标准曲线计算浓度。
• ‌优点‌：快速（5分钟）、灵敏度高（1-20 μg/mL）。

‌（3）其他用途‌

• ‌组织切片染色‌：辅助观察细胞结构（需与其他染料联用）。
• ‌工业染色‌：纺织品或纸张的临时染色剂。

‌3. 与考马斯亮蓝R-250的对比‌

‌4. 注意事项‌

• ‌毒性‌：对皮肤和黏膜有刺激性，操作时需戴手套。
• ‌废弃物处理‌：含染料的废液需按有机溶剂废弃物规范处理。
• ‌储存‌：避光密封保存于4°C，防止氧化失效。
• ‌干扰因素‌：
  • 强离子去污剂（如SDS）会降低染色灵敏度。
  • 高浓度还原剂（如DTT）可能影响吸光度。

‌5. 常见问题与解决方案‌

• ‌背景过深‌：延长脱色时间或提高脱色液更换频率。
• ‌标准曲线线性差‌：确保染料新鲜配制，避免沉淀。
• ‌染色不均‌：染色时充分摇动，避免凝胶粘连。

‌6. 供应商与参考配方‌

• ‌供应商‌：Sigma-Aldrich、Bio-Rad、Thermo Fisher。
• ‌Bradford试剂盒‌：含预混亮蓝G-250的即用型溶液（如Bio-Rad 5000006）。

亮蓝G-250是生物实验室中不可或缺的蛋白质分析工具，其高灵敏度和便捷性使其成为分子生物学研究的经典选择。