等电点沉淀法

等电点沉淀法（isoelectric precipitation）是一种基于蛋白质在等电点（isoelectric point, pI）时净电荷为零、溶解度最低的特性，通过向溶液中加入酸或碱调节pH至目标蛋白质的pI，从而使其沉淀析出的分离纯化方法。该技术属于蛋白质初级分离手段，常用于去除杂蛋白或回收目标蛋白。

蛋白质两性离子与净电荷

蛋白质分子由氨基酸组成，其侧链含有可电离的氨基、羧基等基团。在水溶液中，蛋白质可以结合或释放H⁺，从而形成带正电或负电的状态。当pH等于pI时，蛋白质以两性离子形式存在，正负电荷数相等，分子净电荷为零。此时，由于缺乏同种电荷的静电排斥，颗粒间容易碰撞聚集，稳定性下降。同时，水化能力降低，导致溶解度最小。 ADFASDFAF23RQ23R

pH对沉淀效率的影响

在远离pI的pH下，蛋白质表面净电荷密度高，形成双电层和水化膜，阻止聚集。当pH接近pI时，排斥力减弱，范德华力主导，形成沉淀。最佳沉淀pH通常围绕pI波动，但受溶剂组成影响。 ADFASDFAF23RQ23R

例如，胰岛素在水溶液中的等电点为5.3，在含锌离子的水-丙酮溶液中升至6.0；细胞色素C的pI为10.7，在提取中调pH6.0可除去酸性杂蛋白，再调至7.5-8.0除去碱性杂蛋白。

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• pH调节方式：避免使用强酸强碱直接调节，以防局部过酸过碱导致蛋白质变性。建议采用与溶液中原有盐成分对应的酸或碱（如含硫酸铵时用硫酸或氨水）。
• 温度控制：低温（如4°C）可降低蛋白质变性风险，但可能增加溶液粘度，需平衡沉淀效率。
• 搅拌速度：适当搅拌促进均匀混合，但过快可能破坏沉淀颗粒。

生物制药领域

在胰岛素纯化中，利用等电点沉淀去除杂蛋白。在细胞色素C生产中，通过分步调节不同pH去除酸性及碱性杂质。此外，乳清蛋白、大豆蛋白的工业化分离常采用等电点沉淀。

与其他方法的结合

由于单一等电点沉淀不完全（蛋白质在pI仍有微小溶解度），常与盐析、超滤、离子交换层析联用。例如：先等电点沉淀粗分离，再用硫酸铵盐析提高纯度。 ADFASDFAF23RQ23R

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