亲和偶联
概念
用氨甲蝶呤偶联琼脂糖亲和吸附法从人菌体展示文库中筛选氨甲蝶呤相互作用蛋白
方法
利用氨甲蝶呤(MTX)偶联琼脂糖凝胶吸附法从人肝脏细胞cDNA噬菌体展示文库中筛选与MTX相互作用的蛋白.
过程
:以偶联于琼脂糖凝胶表面的MTX为配基,通过"结合-洗脱-扩增"过程筛选与MTX相互作用的噬菌体.利用PCR对筛选 结果进行监测,对筛选得到的噬菌体PCR产物进行序列测定和基因同源性分析.结果:通过五轮亲和筛选富集到特异噬菌体克隆,再通过PCR获得cDNA插入片段.通过BLAST程序搜索GenBank,证明筛选到的片段与人PI-3K相关蛋白激酶SMG-1异构体1蛋白同源性达100﹪
结论
利用偶联MTX的琼脂糖凝胶作为筛选基质,从T7噬菌体展示cDNA文库中富集特异噬菌体是一种方便、高效的MTX相互作用靶蛋白筛选方法,可为探讨小分子药物的分子作用机制提供借鉴和参考.
影响
随着新的合成基质和偶联化合物的出现以及对IAC研究的深人，必将使免疫亲和色谱在工业性生产纯化蛋白质的应用逐渐得到发展。
http://scholar.ilib.cn/A-swgcjz200710014.html
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