定量PCR

定量PCR是PCR的一种。PCR仪目的为了基因扩增。在基因扩增中最重要的就是升降温过程，最早的PCR就是三个水浴锅，一个机械臂，定时抓出反应槽转换水浴锅。PCR的结果需要借助其他手段来检测。后来随着定量技术的发展，将PCR和检测做成一体，就形成了定量PCR仪。还可以与荧光技术结合，同时在每个扩增过程都能实施监控。

定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。

广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：

• 外参法+终产物分析：样本与阳性参照在两个反应容器内反应。没有对样本进行质控监测，易出现假阴假阳结果，没有监测扩增效率，定量不准。
• 内参法+终产物分析：样本与阳性参照在一个反应容器内反应。对样本进行质控监测，排除假阴结果，但定量不准。
• 外标法+过程监测：监测扩增效率，阳性样本定量准，但无法排除假阴结果。
• 内参法+过程监测：样本与阳性参照在一个容器内反应，存在竞争性抑制，起始模板量浓度高的反应会抑制低浓度反应，定量不准。
• 外标法+过程监测+内对照：监测扩增效率，阳性样本定量准，同时排除假阴结果。这种类型是应该提倡的。

狭义概念的定量PCR技术（严格意义的定量PCR技术）是指用外标法（荧光杂交探针保证特异性）通过监测PCR过程（监测扩增效率）达到精确定量起始模板数的目的，同时以内对照有效排除假阴性结果（扩增效率为零）。在国家没有出台阴阳判定标准时，所用PCR系统灵敏度最好达到一个拷贝（一个病毒）。从理论上说，只要有一个拷贝数，样本就算阳性；一个拷贝数都没有才算阴性。

定量PCR可以得出准确的定量结果，改变了PCR只用作微量物定性测定的历史，并可进行动态检测和病程疗效分析。同时让质控的建立成为可能，以保证结果的准确性。能对基因突变进行分析。

PCR过程的监测有多种检测模式。最常用的有三种检测模式：

• Higuchi, R., Fockler, C., Dollinger, G., & Watson, R. (1993). Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions. Biotechnology, 11(9), 1026-1030.
• Heid, C. A., Stevens, J., Livak, K. J., & Williams, P. M. (1996). Real time quantitative PCR. Genome Research, 6(10), 986-994.
• Bustin, S. A., Benes, V., Garson, J. A., Hellemans, J., Huggett, J., Kubista, M., ... & Wittwer, C. T. (2009). The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clinical Chemistry, 55(4), 611-622.
• Livak, K. J., & Schmittgen, T. D. (2001). Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2^−ΔΔCT method. Methods, 25(4), 402-408.
• 王海燕, 李金明. (2008). 实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用. 中华检验医学杂志, 31(1), 98-101.
• 张驰, 刘芳. (2015). 定量PCR技术在病原微生物检测中的应用. 中国生物工程杂志, 35(4), 76-81.